خالص‌سازی ترکیبات فراکشن ایمونومدولاتور سیر با استفاده از HPLC

مقدمه: خواص دارویی گوناگونی برای سیر و ترکیبات جداشده از آن گزارش شده است. مطالعات ما و سایرین نشان‌دهنده تاثیر سیر بر پاسخ‌های سیستم ایمنی است. در مطالعات قبلی نشان داده شد که خواص ایمونومدولاتوری سیر مربوط به ماده موثره‌ای است که در فراکشن R10 جدا شده است. هدف: در این تحقیق به هدف خالص‌سازی ترکیبات فراکشن ایمونومدولاتور مورد نظر از تخلیص به روشHPLC استفاده شده است. روش بررسی: عصاره خام آبی سیر همدان تهیه شد. به منظور جداسازی پروتئین‌های بین10 الی 50 کیلو دالتون از اولترافیلترسیون استفاده شد. اجزای فراکشن R10جمع‌آوری شده به کمک کروماتوگرافی فاز معکوس HPLC روی ستون سمی- پرپاراتیو (cm 25 × 1) 10TPV 208 Vydac که یک ستون فاز معکوس C8 است، از یکدیگر جداسازی شدند. برای تخمین اندازه پروتئین‌های جدا شده با RP-HPLC از روش تریسین SDS-PAGE استفاده شد. برای رنگ‌آمیزی از محلول کوماسی بلو R250 و برای نمونه‌های کم که با رنگ‌آمیزی با کوماسی بلو مشخص نمی‌شوند، از رنگ‌آمیزی نیترات نقره استفاده شد. نتایج: با استفاده از ستون HPLC فاز معکوس C8 در شیب 25/0 درصد (دقیقه /حلال B) و سرعت 1 میلی‌لیتر بر دقیقه در مدت 60 دقیقه، تعداد 6 فراکشن عمده با نام‌های 1- الی 6 جمع‌آوری شدند. از این میان فراکشن‌های 0 و 1 و 3 باندهایی را در محدوده 12 کیلو دالتون نشان دادند و برای بررسی‌های بعدی نگهداری شدند. نتیجه‌گیری: با کمک سیستم اولترفیلتراسیون می‌توان به سرعت به ترکیبات پروتئینی با وزن بین 10 الی 15 کیلو دالتون دست یافت. با استفاده از کروماتوگرافی فاز معکوس C8 اجزای این فراکشن به راحتی از هم جدا می‌شوند. سه فراکشن در محدوده وزن مولکولی 12KD به دست می‌آیند. بررسی‌های بیشتر جهت ارزیابی خواص ایمونومدولاتوری ترکیبات جداشده با استفاده از آزمون‌های بیولوژیک ضروری است.